NY∕T 3279.1-2018 病毒微生物农药 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 第1部分：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒母药(农业)
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ID： |
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1.05 |
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18 |
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日期： |
2021-12-26 |
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ICS 65.100,B17 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3279.1 一2018,病毒微生物农药吉宿银纹夜峨核型,多角体病毒第1 部分:茵宿银纹夜峨,核型多角体病毒母药,Viral-based insecticides-Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcNPV )一,Part 1 :Autographa cal扩， ornica nucleopolyhedrovirus technical concentrate ( TK ),2018-07 -27 发布2018-12 一01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,NY/T 3279. 1-2018,目。吕,NY/ T 3279 (( 病毒微生物农药盲宿银纹夜峨核型多角体病毒》分为2 个部分:,一一第1 部分: 首宿银纹夜娥核型多角体病毒母药;,一一第2 部分:首稽银纹夜峨核型多角体病毒悬浮剂,本部分为NY/ T 3279 的第1 部分,本部分按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口,本部分起草单位: 农业农村部农药检定所、中国科学院动物研究所、河南省济源白云实业有限公司,本部分主要起草人:秦启联、杨峻、张寰、王晓军、方分分、张继红、郭明程,I,NY/T 3279. 1-2018,范围,病毒微生物农药茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒,第1 部分:茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒母药,本部分规定了茵稽银纹夜峨核品的检验与验收以及标志、,标签、包装、储运、,本部分适用于,2,下列文件对,件。凡是不注日期,GB/ T 1601,GB/ T 1604,GB/ T 16,3,3. 1,GB 3796,GB 4789.,GB 6682,GB/ T 81,GB/ T 1,GB 20813,下列术语和,茵蓓银纹夜峨核,caJ ωncentrate(TK),以病毒包涵体为主要成黯献含噩菇黠纹砸酶胃病毒，温跻况还会包含伴随病毒,扩增而产生的宿主昆虫或细胞,3. 2,病毒包涵体polyhedral inclusion,病毒水平传播的主要载体形式，其结构特征是病毒粒子包埋于蛋白质基质的多角体中,3.3,生测效价比potency ratio,根据药物的药理和对生物体的作用设计试验，比较样品、标准品引起的生物反应，测定药物效价或,其生物学活性,3. 4,菌落形成单位colony fonning units (CFU),由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。指在琼脂平板上经过,一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数目的单位,1,NY/T 3279. 1一2018,3. 5,杂菌菌落总数number of microbial contaminants,将茵稽银纹夜娥核型多角体病毒母药样品稀释后涂布在琼脂营养培养基上，所得到的微生物(真菌,和细菌) 菌落数之和,4 要求,4. 1 外观,通常为灰白色或褐色均匀粉状物，无可见机械杂质，不应有结块。或者灰白色或褐色液体，存放过,程中可能出现沉淀，经搅动能恢复原状，不应有结块,4. 2 指标,茵稽银纹夜峨核型多角体病毒母药还应符合表1 的要求,表1 茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒母药控制项目指标,项目指标,病毒包涵体数量.PIB/ g 或PIB/ mL 注1 00 亿,生测效价比(标准品LCso/ 待测样品LCso) . % 二三80 .0,杂茵茵落总数.CFU/ mL ~l. OX 107,pH 5. 0-7. 5,(固体) 干燥减量. % ~5 . 0,细度(通过7 5 μm 标准筛). % 二三95 . 0,5 试验方法,5.1 -般规定,除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液，试验用水为GB/ T 6682 中规定,的三级水,5. 2 抽样,按照GB/ T 1605 中"固体制剂采样，，"液体制剂采样"方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件,最终抽样量应不少于200 g(mL) ,5. 3 毒种定性鉴别,5. 3. 1 病毒毒种的分子鉴定,盲稽银纹夜娥核型多角体病毒毒种的鉴定，采用PCR 扩增及DNA 测序分子鉴定的方法。通过提,取试样中病毒DNA 作为模板，用AcNPV 的ie - 1 基因、helicase 基因和gρ64 基因的特异性引物分别,进行PCR 扩增反应，琼脂糖凝胶电泳检测。当PCR 扩增片段大小约为1 kb 或300 bp 时，回收扩增片,段，并克隆到T 载体上，用M1 3 通用引物对克隆后的PCR 产物进行测序，将测序结果分别与AcNPV,(E2 株)的ie - 1 基因， helicase 基因及gρ64 基因进行比对分析，两者的序列一致性均应该大于98 % ，即,认定试样中含有茵稽银纹夜峨核型多角体病毒,盲稽银纹夜峨核型多角体病毒有效成分描述参见附录A 。盲宿银纹夜娥核型多角体病毒毒种的分,子鉴定方法按照附录B 的规定,5. 3. 2 病毒毒种的生物测定鉴别,生物测定的方法作为茵宿银纹夜峨核型多角体病毒毒种分子鉴定的补充。分别对粉纹夜峨、甜菜,夜峨和家蚕3 种昆虫幼虫进行生物测定。粉纹夜娥和甜菜夜峨感病症状:虫体体色粉白，体节膨大，行,动缓慢，甚至液化而亡， 其感病特征非常明显。而家蚕的校正死亡率应小于20 % ，依此可以确定试样中,NY/T 3279. 1-2018,的病毒为首宿银纹夜峨核型多角体病毒,病毒毒种生物测定鉴别的方法参见附录C ,5. 4 病毒包洒体的定量检测,5. 4. 1 血球计数极法,5……
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